在继续大鼠雌二醇受体(ER) ELISA酶联免疫试剂盒的操作步骤时，我们需格外注意每一步的精确执行，以确保实验结果的准确性和可靠性。
首先，完成样品准备阶段后，进入关键的加样步骤。使用移液器小心地将处理好的样品及不同浓度的标准品分别加入相应的微孔中，注意避免气泡产生，以免影响后续反应。每个样品和标准品至少设置两个复孔，以提高实验的重复性和可信度。
接下来，是加酶标试剂的步骤。按照试剂盒说明书指示的量，向每个微孔中加入适量的酶标试剂，轻轻晃动或轻敲板框，使试剂充分混匀。此步骤是形成抗原-抗体-酶标抗体复合物的重要过程，需确保酶标试剂均匀分布于每个微孔中。
随后，进行温育。将加好试剂的酶标板用封板膜封好，放入预设好温度的恒温箱中，按照说明书规定的时间进行温育。温育期间，避免酶标板受到剧烈震动，以免影响反应效果。
温育结束后，取出酶标板，进行洗涤。小心揭去封板膜，弃去孔内液体，然后向每孔加入适量的洗涤液，静置一段时间后甩去洗涤液，如此重复洗涤多次，以彻底去除未结合的物质，减少非特异性干扰。
至此，我们已完成了ELISA检测的前半部分关键步骤。接下来，将进行显色反应和终止反应，并通过酶标仪测定各孔的吸光度值，最终根据标准曲线计算出样品中雌二醇受体的含量。每一步操作都需细致入微，以确保实验结果的准确无误。