应用双抗体夹心法测定标本中人新布尼亚病毒（NBV）表达。用纯化的人新布尼亚病毒（NBV）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中新布尼亚病毒（NBV）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP 标记的新布尼亚病毒（NBV）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中人新布尼亚病毒（NBV）的存在与否。该实验的关键在于其高度的特异性和敏感性，得益于精心筛选的抗体对以及优化的反应条件。当样本中存在人新布尼亚病毒（NBV）时，会与固相抗体特异性结合，这一步骤确保了只有目标病毒能够被捕获，大大减少了非特异性干扰。随后，加入的HRP标记抗体不仅进一步验证了抗原-抗体结合的有效性，还通过酶促反应放大了信号，使得即使是微量病毒也能被准确检测。
颜色变化的深浅直接反映了样本中NBV的含量：颜色越深，意味着病毒载量越高；反之，则表明病毒含量较低或不存在。通过精确测量OD值，并与预设的CUTOFF值进行对比，研究人员能够迅速、准确地判断测试结果，为临床诊断和治疗方案的制定提供科学依据。
此外，该Elisa试剂盒还具备操作简便、重复性好、耗时短等优势，适用于大规模筛查和疾病监测，对于控制人新布尼亚病毒相关疾病的传播具有重要意义。随着技术的不断进步，此类试剂盒的灵敏度和准确性将持续提升，为人类健康防护筑起更加坚实的防线。