植物组织培养就是利用植物的性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物组织培养按其原始意义,就是指愈伤组织培养。但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术。
仪器设备:1.酒精灯、三角烧瓶,培养皿;2.镊子、剪刀、剖针;3.双筒解剖显微镜;4.光照培养箱或温室;
材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。
试剂
(1)MS培养基,植物激素:NAA、6-BA等;
(2)饱和漂液(次氯酸钠);
(3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;
(4)无菌水
四.实验步骤
豌豆苗的茎尖培养
⑴取发芽6天的豌豆幼苗10株,简取1厘米左右的茎尖,浸入70%的酒精中1分钟,再浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒15分钟,(此步以后要求无菌)用无菌水中冲洗5次,在灭菌的滤纸上吸干水分,放入灭菌的培养皿中。
⑵在双目解剖镜下,用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥,用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。
⑶将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-苄基腺嘌呤(6-BA)的培养基上诱导愈伤组织形成,用封口膜将培养皿封好。
(4)在恒温培养箱中,26℃下,培养六周,形成愈伤组织,经继代后,可用于生根培养
(5)生根培养阶段,将已形成愈伤组织的豌豆茎尖转移至含有较低浓度植物激素(如减半的NAA和6-BA)的MS培养基中,以促进根系的形成。此阶段需继续维持无菌条件,避免微生物污染影响培养效果。
(6)观察记录:在生根培养过程中,定期使用双筒解剖显微镜观察根系的生长情况,记录根的数量、长度及形态变化。同时,注意培养皿内的湿度和光照条件,适时调整以优化培养环境。
(7)炼苗与移栽:当根系发育良好,达到一定数量和长度时,开始进行炼苗处理。逐步减少培养箱内的光照强度和时间,使植株逐渐适应外界环境。炼苗结束后,将植株小心地从培养基中取出,洗净根部残留的培养基,移栽至经过消毒的土壤中,置于温室或适宜的生长环境中继续培养。
(8)后续观察与管理:移栽后的豌豆植株需密切关注其生长状况,包括叶片颜色、植株高度、开花结果等,及时浇水、施肥并防治病虫害,以确保植株健康生长,最终收获种子或用于进一步的遗传学研究。
通过本次实验,不仅掌握了植物细胞和组织培养的基本技术,还深刻理解了无菌操作的重要性及其在植物繁殖、遗传改良等方面的广泛应用价值。