针对贴壁细胞和悬浮细胞，常用的细胞固定方法确实存在着显著的差异，这些差异源自于细胞生长特性的不同以及后续实验需求的多样性。
对于贴壁细胞而言，由于其紧密地附着于培养皿或载玻片表面，因此常采用原位固定的方法。这种方法通常涉及将细胞培养物暴露于适当浓度的固定剂中，如甲醛戊二醛或甲醇等，这些固定剂能够有效地穿透细胞膜，迅速稳定细胞内的蛋白质结构和形态。固定过程需严格控制时间，以避免过度固定导致的细胞结构破坏。通过原位固定，贴壁细胞得以在保持其原位状态的同时，获得良好的形态学保存，为后续染色、显微镜观察及分子生物学分析等实验步骤奠定坚实基础。
下面将分别介绍这两种类型细胞的固定方法：
（1）贴壁细胞的固定方法：
贴壁细胞是在培养皿底部附着生长的细胞，固定的目的是保持细胞形态和蛋白质结构的完整性。常用的贴壁细胞固定方法有：
▶ 甲醛固定法：将细胞培养液倒掉，用4%甲醛进行固定。通常在室温下固定10-30分钟，然后洗涤掉甲醛。
▶ 乙醛固定法：使用2-4%乙醛溶液进行固定，固定时间和温度根据实验需要和细胞类型而定。
▶ 冰醋酸固定法：将冷冻的乙醇或冰醋酸溶液直接加到培养皿中，使细胞迅速固定。
在固定之后，可以使用PBS洗涤细胞，以去除固定剂和其他污染物。固定的细胞可以用于后续的免疫染色或其他细胞分析。
（2）悬浮细胞的固定方法：
悬浮细胞是在培养液中自由悬浮生长的细胞，固定的目的是保持细胞的形态和蛋白质结构，以便进行后续的免疫染色或其他细胞分析。常用的悬浮细胞固定方法有：
▶ 乙醇固定法：将细胞用70%至100%浓度的乙醇进行固定。通常在-20°C或4°C下固定20-30分钟。
▶ 甲醛固定法：将细胞用4%甲醛进行固定。固定时间和温度可以根据实验需求进行调整。
▶ 醋酸乙酯固定法：将细胞用醋酸乙酯固定，通常需要在室温下固定一定的时间，然后用PBS洗涤细胞。
在固定悬浮细胞后，可以用PBS洗涤去除固定剂，并进行后续的染色或分析。
相比之下，悬浮细胞由于缺乏附着点，其固定方法则需更加灵活多变。一种常见做法是使用离心技术将悬浮细胞沉淀下来，随后以类似贴壁细胞的方式进行固定。此外，还可采用直接固定法，即将悬浮细胞与固定剂混合后，在温和搅拌下使细胞均匀接触固定剂。为确保固定效果，有时还需结合使用细胞滤网或离心洗涤步骤，以去除多余的固定剂并减少背景干扰。通过这些精细的操作流程，悬浮细胞同样能够获得满意的固定效果，为后续实验提供高质量的细胞样本。