DH5α感受态细胞实验的关键准备步骤后，接下来便是将外源DNA导入感受态细胞的核心操作过程。
首先，从-80℃冰箱中取出DH5α感受态细胞，迅速置于冰上融化，此过程需避免反复冻融，以保持细胞的活性。同时，将待转化的DNA（如质粒）轻柔混匀，并取适量（一般不超过感受态细胞体积的1/10）加入到感受态细胞中，用枪头轻轻吹打几次混匀，注意动作要轻柔，以免损伤细胞。
随后，将混合液在冰上静置30分钟，让DNA充分吸附到感受态细胞表面。此期间，可预热不含抗生素的LB培养基至室温，为后续的复苏步骤做准备。
时间到后，将感受态细胞-DNA混合物置于42℃水浴中热激90秒，然后迅速转移回冰上冷却2-3分钟。这一步是转化过程的关键，通过温度的急剧变化促使细胞摄取外源DNA。
最后，向冷却后的混合物中加入预热的LB培养基，体积约为原始感受态细胞体积的5-10倍，然后置于37℃摇床中，以200-250rpm的速度振荡培养1小时，使细胞恢复生长并表达质粒上的抗生素抗性基因。
经过这一系列的精细操作，DH5α感受态细胞已成功导入了外源DNA，接下来的步骤将是通过涂布平板或液体筛选等方法，挑选出成功转化的菌落，进行后续的鉴定与分析。