支原体清除剂的一般使用

支原体去除剂在细胞培养中的应用虽能有效清除污染，但其对细胞本身的影响仍需谨慎评估。实验数据显示，部分抗生素类去除剂会干扰细胞代谢周期——例如浓度超过5μg/mL的喹诺酮类药物可使HEK293细胞的增殖速率降低37%，这种抑制作用往往在停药后仍持续2-3代。更值得关注的是，某些含表面活性剂的化学清除剂会导致细胞膜表面蛋白的暂时性脱落，流式细胞术检测发现CD44和整合素β1的表达量在处理后24小时内下降约40%。

支原体(mycoplasma)，又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生

支原体清除试剂(Mycoplasma Removal Agent，MRA)是一种用于抑制和清除在培养细胞过程中广泛存在的支原体污染的试剂，亦可称为支原体去除剂。MRA既可以用于去除细胞中已有的支原体污染，也可以用于防止支原体污染。MRA的具体工作浓度因支原体的种类不同而有所不同，在实际清除或防止支原体污染时，可使用试剂供应商推荐的工作浓度，也可以自行测试获取适当的工作浓度。在实验前，应根据不同的实验要求、细胞类型等进行优化，确定最佳条件。

支原体清除剂的一般使用方法：

1、将推荐浓度的支原体清除剂添加到被支原体污染的细胞培养物中，并至少培养1周；

2、若推荐浓度对去除支原体无效，可尝试提高工作浓度；

3、对于培养基更换或培养物转移(传代)，使用含有相同浓度支原体清除剂的培养基；

4、在不使用支原体清除剂的情况下转移细胞培养物数次，并确认污染支原体没有再生。

为平衡清除效率与细胞活性，建议采用梯度处理策略。首日使用治疗浓度（如2μg/mL普那霉素）冲击处理6小时，后续3天改用0.5μg/mL维持浓度。这种方案在保持85%以上清除率的同时，能将细胞凋亡率控制在15%以内。值得注意的是，原代细胞对去除剂更为敏感，在处理人间充质干细胞时，建议将暴露时间缩短至常规细胞系的1/3。