判断iPSC是否成功重编程，需要从形态、分子标志和功能三个维度综合验证，以下是具体方法：
一、形态学特征
集落形态：成功重编程的iPSC会形成紧凑、边界清晰的克隆，细胞核大、核仁明显，细胞质较少。
对比ES细胞：其形态与胚胎干细胞（ES细胞）高度相似，但需进一步分子检测确认。
二、分子标志检测
多能性基因：通过免疫荧光或流式细胞术检测Oct3/4、Sox2、Nanog等核心基因的表达，其水平应与ES细胞相当。
表面标志物：使用SSEA-4、TRA-1-60等抗体标记，阳性表达表明细胞进入多能状态。
三、功能验证
三胚层分化：通过胚胎样球体（EB）实验，观察iPSC能否分化为内、中、外胚层细胞，检测分化标志物（如SOX17、TUJ1）。
染色体稳定性：进行G-banding或CGH阵列分析，确保无染色体畸变。
四、质控要点
污染控制：通过无菌性和支原体检测排除污染。
细胞活力：采用台盼蓝染色或MTT/CCK-8法评估细胞健康度。