检测人心磷脂合成酶(CRLS1)的ELISA试剂盒操作其实很规范,核心是抗体夹心法,通过显色反应定量检测。以下是关键步骤和要点:
一、检测原理
试剂盒采用抗体夹心法:抗人CRLS1抗体包被酶标板,标本中的CRLS1与抗体结合后,加入生物素化抗体和ABC复合物形成免疫复合物,最后通过TMB显色底物显色,450nm处测OD值,浓度与OD值呈正比。
二、操作步骤
样本处理:组织样本需均质后取1.0g±0.05g,加酶标二抗孵育。
加样与孵育:标准品和样本加样后,加入酶连接物和抗体溶液,室温孵育1小时。
洗板与显色:倒出液体后洗板,加入TMB显色液,避光反应15分钟。
读数:加终止液后,450nm处读OD值。
三、结果计算
OD值处理:建议减除空白孔值(若空白孔OD低于0.1可直接计算)。
标准曲线:以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制曲线,根据样品OD值计算含量。
四、试剂盒选择
信裕生物:检测范围0.78-50ng/ml。
澳睿赛生物:采用双抗体夹心模式,结果判断需减空白孔值。
五、注意事项
洗板时避免微孔干燥。
样本和标准品需做双孔平行实验。
显色后5分钟内读数。