上海一研生物科技有限公司

包装与品牌：

产品介绍：             

产品说明

本产品可用于拟南芥、烟草、水稻等植物样本的基因纯化。纯化原理是利用硅胶膜柱可逆吸附体系中的DNA，经漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多纯化液洗脱获得基因组DNA。一次可从不超过100材料中提取到2-20μg的高纯度基因组(OD260/OD280=1.7-1.9)，此基因组DNA可直接酶切等后续实验。

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷

保存条件

RNase保存于-20℃。其他的室温保存

注意事项

●漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇，即15ml漂洗液PE加入45ml无水乙醇，30ml漂洗液PE加入90ml无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

●缓冲液GPL室温保存可能会有沉淀产生，在56℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

●应尽量使用新鲜的实验材料，确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA的实验材料应尽快置于液氮或-70℃

冰箱中保存并避免反复冻融。

●使用液氮研磨组织材料时，应随时加入液氮，确保提取的基因组DNA不被降解。

●基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

●所有离心步骤均为室温下进行。

●请严格按照操作步骤操作。

操作步骤

1 取植物新鲜组织约100mg或干重组织约30mg，加入液氮充分研磨。

2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μl65℃预热缓冲液GPL的离心管中(实验前在预热的GPL中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%)，加入1μlRNase，迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20min，水浴过程中颠倒离心管以混匀样品。

3 加入700μl氯仿，充分混匀，12,000rpm(~13,400×g)离心5min。

●如果是提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚:氯仿/1:1进行等体积抽提。

4 小心将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入等体积缓冲液GPD，充分混匀。

5 将混匀的液体转入纯化柱，静置1min，12,000rpm离心30sec,弃滤液。(吸附柱容积为700μl左右，可分次加入离心。)

6 向纯化柱中加入500μl去蛋白液PS。12,000rpm离心30sec,弃滤液。

7 向纯化柱中加入500μl漂洗液PE。12,000rpm离心30sec,弃滤液。

8 重复步骤7，向纯化柱中加入500μl漂洗液PE。12,000rpm离心30sec,弃滤液。

9 离心纯化柱，12,000rpm离心2min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

●此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

10 将纯化柱置于新的1.5ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加40-100μl纯化液TE。室温放置2min。12,000rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

●纯化液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。

●对纯化液TE60℃预热，会提高基因组DNA的产量。

注意事项：

  ● RNA样本保存液如出现沉淀，37℃加热振荡混匀。

  ● 加入RNA样本保存液后，样本不能立即置于-20℃或-80℃，要先4℃置放过夜，待组织充分浸润后再置于低温保存。

  ● 样品浸没在RNA样本保存液中，可在37℃保存1天，25℃保存1周，4℃保存1个月，-20℃长期保存；使用时请注意保存时限。

  ● 保存在RNA样本保存液中的样本可不经特殊处理，离心或直接使用和新鲜组织一样的RNA提取方法提取RNA。

  ● RNA样本保存液可以配合各种常见的RNA提取试剂盒使用，如东盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取试剂盒，不影响试剂盒操作，不影响提取所得RNA质量及其后续实验。