上海一研生物科技有限公司

包装与品牌：

产品介绍：             

产品说明

本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是首先利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*，细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附体系内的基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于未凝固全血，以及经各种抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸）处理过的全血样本。一次可从5-10 ml全血中提取到30-200 μg高纯度基因组DNA（OD260/OD280 =1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

*本产品不能从全血中直接提取DNA，要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA，建议选择Quick血液基因组DNA提取试剂盒（货号：N1131、N1132）。

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

操作步骤

1   取血液样本，每5-10 ml血液加入到一只50 ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。5,000 rpm离心3min，弃上清，收集白色或淡红色沉淀，重复上诉步骤。

● 如沉淀仍然呈深红色，表明红细胞裂解不充分，可再加等体积红细胞裂解液RS处理一次。

● 对于哺乳动物全血，每5-10 ml全血中可提取30-200 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA，因其血液中红细胞有细胞核，血液用量勿超过500 μl/离心管。每500 μl全血中可提取200 μg的基因组DNA。

2   加入5 ml消化缓冲液DS，漩涡振荡至形成完全均一的悬浮液。

● 如需去除RNA，可加入100 μl RNase A（100 mg/ml），振荡15秒，室温放置5min。

3   加入500 μl蛋白酶K和5.5 ml裂解液MS，漩涡振荡混匀。65℃温浴15 min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

● 加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。

4   加入5.5 ml无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀。简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min，弃滤液。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5   加入10 ml去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量基因组DNA。

6   加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

7   加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

8   12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

9   将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100μl洗脱液TE。室温放置2min。

10   12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

● 洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。

● 对洗脱液TE 60℃预热，会提高基因组DNA的产量。

注意事项：

  ● RNA样本保存液如出现沉淀，37℃加热振荡混匀。

  ● 加入RNA样本保存液后，样本不能立即置于-20℃或-80℃，要先4℃置放过夜，待组织充分浸润后再置于低温保存。

  ● 样品浸没在RNA样本保存液中，可在37℃保存1天，25℃保存1周，4℃保存1个月，-20℃长期保存；使用时请注意保存时限。

  ● 保存在RNA样本保存液中的样本可不经特殊处理，离心或直接使用和新鲜组织一样的RNA提取方法提取RNA。

  ● RNA样本保存液可以配合各种常见的RNA提取试剂盒使用，如东盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取试剂盒，不影响试剂盒操作，不影响提取所得RNA质量及其后续实验。