小鼠肿瘤坏死因子α ELISA试剂盒检测原理
将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。在实验操作过程中，需严格控制反应条件以确保检测结果的准确性。首先，标准品和样本的加样体积需精确至微升级别，避免因加样误差导致标准曲线偏移。洗涤步骤尤为关键，需采用洗板机或手动充分洗涤，每次洗涤后需在吸水纸上拍干孔内液体，避免交叉污染。
显色反应对时间和温度敏感，建议在25℃避光环境下孵育15-30分钟，待标准品孔出现明显梯度蓝色后，及时加入终止液终止反应。终止后30分钟内应完成读数，避免颜色衰减影响OD值。
数据分析时，建议采用四参数逻辑曲线拟合（4PL）法绘制标准曲线，其能更好地反映低浓度与高浓度区间的非线性关系。若样本OD值超出标准曲线范围，需用稀释液适当稀释后重新检测。此外，复孔检测的CV值应控制在15%以内，以确保数据可靠性。
该试剂盒适用于血清、血浆或细胞培养上清液等样本类型，但需注意避免反复冻融或溶血样本，以免干扰检测。通过优化实验流程和严格质控，可高效评估炎症、感染或肿瘤微环境中的TNF-α水平，为基础研究与临床诊断提供精准数据支持。