细胞治疗产品（CTP）和组织工程等前沿生物制造领域对无菌环境要求极高。传统无菌检测依赖微生物培养，通常需7–14天[，而快速微生物检测方法（RMMs）也需约7天[，难以满足及时放行的需求。支原体污染尤其棘手，因其难以察觉且可长期潜伏[。因此，开发更快速、灵敏、非侵入性的检测手段成为行业迫切需求。
一、酶底物法
原理：用MMO-MUG培养基同时检测大肠菌群和大肠埃希氏菌，通过颜色变化判断污染。
操作：水样加培养基摇匀，36℃培养24小时，变黄即有大肠菌群。
适用：水、食品、土壤等污染评估。
二、PCR检测法
原理：针对支原体16S rRNA基因设计引物，扩增后电泳观察。
操作：棉签擦拭培养箱内壁，提取DNA做PCR，无条带则无污染。
优势：灵敏度高、结果快。
三、DNA荧光染色法
原理：用荧光染料（如Hoechst）标记DNA，显微镜下观察。
操作：共培养细胞和Vero细胞，染色后看荧光斑点。
特点：直观快速。
四、高内涵筛选法
原理：结合荧光成像和自动化分析，检测核外DNA。
操作：细胞接种后染色，用系统分析图像。
优势：准确度高。
五、支原体快速检测试纸法
原理：试纸抗体与支原体抗原结合变色。
操作：棉签取样，浸入提取液后观察。
特点：操作简单、结果快。
六、显色培养基检测法
原理：通过菌落颜色鉴定微生物。
操作：用显色培养基培养，根据颜色判断。
适用：食源性致病菌检测。
七、放射测量法
原理：用放射性同位素标记底物，检测代谢产物。
操作：培养基加放射性底物，测CO₂释放。
适用：菌血症快速诊断。
八、NPS/NBB-A培养基检测法
原理：NPS检测啤酒中乳酸菌，NBB-A检测严重污染。
操作：样品加培养基培养，观察结果。
特点：啤酒酵母抑制剂避免干扰。
九、多管发酵法
原理：EC培养基发酵产气，伊红美蓝平板确认。
操作：水样接种EC培养基，产气后转种平板。
适用：耐热大肠菌群测定。
十、营养琼脂培养基检测法
原理：菌落计数法检测细菌总数。
操作：水样与培养基混匀，36℃培养48小时。
适用：水质细菌总数检测。
小结：PCR、荧光染色和试纸法适合快速筛查，显色培养基和多管发酵法更精准，选方法时看你的具体需求和场景。